与新冠病毒检测一样,猴痘核酸检测采用的也是荧光PCR法。
世界卫生组织近日报告,已有超12个国家出现猴痘病毒感染病例,覆盖欧洲、北美洲、大洋洲和非洲。为了检测出这种病毒,上海多家体外诊断企业已行动起来,在很短时间内研发出猴痘病毒核酸检测试剂盒。目前,之江生物、默禾医疗、芯超生物等企业研发的这种产品获得了欧盟CE认证,将进入国际市场。
两种猴痘病毒毒性大不同。
默禾医疗董事长唐荣介绍,猴痘病毒与天花一样,属于正痘病毒。其外形为圆角砖形或卵圆形,大小为200—400纳米,基因组是双链DNA。在理化特性上,这种病毒介于天花和痘苗病毒之间,能抵抗乙醚,对干燥有较强抵抗力,但易被氯仿、甲醇和福尔马林灭活。
人类与猴痘病毒交手已有半个多世纪。1958年,这种病毒首次在猴子群体中被发现。1970年,刚果民主共和国发现了首例人感染猴痘病毒的病例。然而在最近全球多国出现不寻常的猴痘疫情之前,大多数感染都发生在中非和西非地区。
猴痘病毒主要分为“刚果盆地分支”和“西非分支”两种,前者的毒性较强,病死率约为10%;后者的毒力较弱,病死率约为1%。目前,欧美多国发现的猴痘病毒属于毒性较轻的“西非分支”。
彩色透射电子显微捕获的猴痘病毒颗粒(英国《新科学家》)
与流感一样,猴痘也是自限性疾病,即便不治疗,也会自愈。一般的病程是:潜伏期为5—21天,感染者在前5天可能出现发热、剧烈头痛、淋巴肿大、肌肉疼痛和强烈气喘等症状;随后可能出现皮疹,皮疹会从面部逐步扩散到身体其他部位,尤其是四肢,最后会结痂脱落。
荧光探针还能为病毒分型
与新冠病毒检测一样,猴痘核酸检测采用的也是荧光PCR法。PCR的意思是聚合酶链式反应,其基本原理是利用双链DNA在高温下解链、在低温下结合的特性,通过控制温度变化来模拟DNA在体内的复制过程。这种技术能用于测定古生物化石、历史人物遗体、犯罪嫌疑人毛发和体液中的DNA,也能用于测定病毒核酸。
利用荧光PCR法检测猴痘、新冠等病毒前,科研人员要根据其核酸序列,设计出特异性可与病毒核酸结合的引物(20个左右核苷酸组成的寡核苷酸片段)。如果引物与目标核酸的结合性差,会影响试剂的灵敏度;如果引物还能与其他病原体核酸结合,则会降低试剂的特异性。
默禾医疗旗下公司研制的猴痘核酸检测试剂盒
在DNA聚合酶的作用下,引物延伸并与因高温而解链的DNA结合,变成2条链。PCR扩增仪再次调高温度后,DNA再次解链,引物又会延伸并与之结合,变成4条链。如此升温、降温往复进行,病毒中的核酸片段就像孙悟空分身术一样指数级扩增。
如何把扩增后的病毒核酸检测出来?这要靠荧光探针(30个左右核苷酸组成的带有荧光报告基团和淬灭基团的寡核苷酸片段)。它与引物一样,也能与病毒核酸结合,未降解前不发光。被扩增的特异性片段越多,被降解的荧光探针也越多,发出的荧光量就越高,从而被仪器检测出来。
唐荣表示,默禾医疗研发的试剂盒不仅能检测出猴痘病毒,还能分型,即判定它属于“刚果盆地分支”和“西非分支”。“我们的产品采用多重荧光PCR法,用不同的荧光探针识别猴痘病毒的分支,40分钟就能出结果,比病毒基因测序方法要快得多。”
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